試劑中英文名稱：pGBKT7-Lam Vector 酵母雙雜交對照載體
儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。
產地：陜西西安
載體類型：酵母雙雜交系統載體
載體大小：7.9kb
純度：≥95%
一、Product description：（pGBKT7-Lam酵母雙雜交對照載體）
pGBKT7-Lam是陰性對照質粒,能編碼人Lamin C蛋白(a.a.66-230)和GAL4 DNA-BD(a.a.1-147)的融合蛋白。
其核心功能是驗證實驗中是否存在假陽性相互作用背景，確保實驗結果的特異性。
pGBKT7-Lam is a negative control plasmid that encodes a fusion protein of human Lamin C protein (a.a.66-230) and GAL4 DNA-BD(a.a.1-147).
Its core function is to verify whether there is a false positive interaction background in the experiment and ensure the specificity of the experimental results.
載體定位：
作為標準化對照工具，可避免用戶重復構建陰性對照載體，提升實驗效率。
組成
它主要包含以下關鍵元件：
（1）GAL4 DNA 結合域（DNA-BD）
包含 GAL4 蛋白的 N 端 1-147 位氨基酸，負責結合酵母基因組中的上游激活序列（UAS），是酵母雙雜交系統的核心結構域。
（2）Lamin C 蛋白片段
插入 Lamin C 的 66-230 位氨基酸片段，該蛋白定位在細胞核內，且極少與其他蛋白隨機互作，因此適合作為陰性對照。
（3）c-Myc 表位標簽
位于融合蛋白的 N 端，便于通過 Western blot 或免疫沉淀等技術檢測蛋白表達。
（4）啟動子與篩選標記
ADH1 啟動子：驅動融合蛋白在酵母中組成型表達。
（5）T7 啟動子：支持體外轉錄/翻譯實驗。
抗性標記：大腸桿菌中通過Kan篩選，酵母中通過 TRP1 基因補償se氨酸缺陷，實現營養選擇。
（6）復制系統
在酵母中通過 2μori 實現高拷貝復制，在大腸桿菌中通過 pUCori 復制。
二、酵母雙雜交原理是怎樣的？（pGBKT7-Lam酵母雙雜交對照載體）
酵母雙雜交系統的建立是基于對真核生物轉錄調控過程的認識。
真核生物中基因轉錄需要轉錄激活因子的參與，真核生物的轉錄激活因子含有兩個不同的結構域：DNA結合結構域和DNA轉錄激活結構域，這兩個結構域可以獨立分開，功能互不影響。
BD和AD分別單獨作用并不能激活轉錄反應，只有當二者在空間上充分接近時，才呈現完整的轉錄激活因子活性，使下游基因得到轉錄。
根據這一原理，可設計酵母雙雜交系統。
POF將兩待研究蛋白（蛋白X與蛋白Y）分別與BD、AD結構域構建融合質粒。
將構建好的兩個質粒轉入同一酵母細胞中表達，如果兩蛋白之間不存在相互作用，則下游基因（報告基因）不會轉錄表達；如果兩個蛋白存在相互作用,則BD與AD兩結構域空間上很接近，從而下游基因（報告基因）得到轉錄。
判斷通過報告基因表達與否,即可判斷兩蛋白之間是否存在相互作用。
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用于科研相關領域，不能用于人體實驗！
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